蛋白質(zhì)濃縮與緩沖液置換

應(yīng)用場(chǎng)景：
從低濃度蛋白溶液（如細(xì)胞培養(yǎng)上清或粗提液）中去除小分子雜質(zhì)（鹽離子、溶劑等），同時(shí)濃縮目標(biāo)蛋白至所需濃度。

操作流程：

• ?膜包選擇：根據(jù)目標(biāo)蛋白分子量選擇截留分子量（MWCO）合適的超濾膜（例如，30 kDa膜用于濃縮150 kDa的抗體）。
• ?系統(tǒng)組裝：組裝TFF系統(tǒng)（蠕動(dòng)泵、膜包、壓力表、儲(chǔ)液罐），用純水預(yù)沖洗膜包以去除保存劑。
• ?循環(huán)濃縮：將蛋白溶液泵入系統(tǒng)，調(diào)節(jié)蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速（例如200 RPM）和背壓閥，控制跨膜壓力（TMP）在1~3 bar。
• ?緩沖液置換：在濃縮過(guò)程中持續(xù)添加新緩沖液（透析模式），置換原液中的鹽或雜質(zhì)。
• ?終點(diǎn)判定：通過(guò)UV監(jiān)測(cè)（A280吸光度）或體積減少比例（如濃縮10倍）確定終點(diǎn)。

優(yōu)勢(shì)：

• 避免傳統(tǒng)透析法的長(zhǎng)時(shí)間等待和低效問(wèn)題。
• 可處理大體積樣品（如1 L→10 mL），且活性回收率>90%。

注意事項(xiàng)：

• 避免過(guò)度濃縮導(dǎo)致蛋白聚集（控制TMP不超過(guò)膜耐受極限）。
• 操作后立即用0.1 M NaOH清洗膜包，防止蛋白殘留污染。